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    【促销季】知否知否,应是质肥价瘦   新品上市:ADCC生物学活性检测试剂盒  

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    • Fast Super EvaGreen® qPCR Master Mix

      产品货号: S2008

      产品规格: 100T/500T

      价格(元): 1000/2300

      可替代的同类产品:qPCR SYBR Green Master Mix
    产品概述:
    产品参数:λabs/λem = 500/530 nm (结合 DNA)              λabs = 471 nm (未结合 DNA)
    储存条件:本产品-20℃避光保存,推荐条件下至少可以储存 6 个月以上。使用前,将产品室温下解冻,并轻轻涡旋混匀,解冻后所有实验应在冰上操作。使用后,该产品可以重新冷冻储存。

    产品介绍:

    Fast Super EvaGreen® qPCR Master Mix是一款用于实时定量PCR的即用型试剂盒。其中Super EvaGreen®是一种新型的专门为qPCR和高分辨率溶解曲线分析设计的DNA结合染料,它通过一种按需求释放的机制,极大地降低了对PCR扩增抑制性。

    Fast Super EvaGreen® qPCR Master Mix包含一种化学修饰的热启动Taq DNA多聚酶。这种Taq2 min内可以被完全激活,尤其适用于快速PCR反应。此外,这种Taq DNA多聚酶在室温下没有活性,不会对DNA造成污染,性能远远优于市面上抗体修饰的热启动酶。

    Super EvaGreen®的另一个优点是它的安全性。常规的DNA结合染料存在潜在的致突变性。基于这方面考虑,我们研发设计了Super EvaGreen®染料,它不能透过细胞膜,因而不能与活细胞的基因组DNA结合,确保了其安全性。然而,其他所有的商业性PCR荧光染料都可以在几分钟内进入细胞,例如SYBR Green I,是一种众所周知的环境毒性比溴化乙锭(EB)还要大的诱变剂。

    此外,我们公司的Super EvaGreen® Master Mix还有一个性能也十分卓越,即它的PCR产物可以直接用于凝胶电泳检测,不需要额外添加任何核酸染料。试剂盒中的Super EvaGreen可以作为DNA预染的核酸染料,电泳后可以直接用于观察DNA条带

    说明书:
                  Fast Super EvaGreen® qPCR Master Mix
    常见问题解答:

    Ct值过大
    1、扩增效率低,反应条件不够优化
         重新设计引物;
         更换灵敏度更高的试剂;
         改用三步法反应,降低退火温度
    2、反应成分降解或模板量偏低 设置阳性对照;
         检查RNA质量;
         提高反转录效率
    3、PCR产物太长
         重新设计引物,扩增长度建议100-200bp

    无Ct值或无信号
    1、循环数偏少
         建议扩增循环数35以上,可以根据具体情况增加循环数至45
    2、模板不足或降解
         检测RNA质量;
         提高反转录效率;
         避免cDNA反复冻融
    3、引物失效 
         设置阳性对照;
         凝胶电泳检测是否存在扩增产物

    扩增曲线S型异常
    1、ROX添加不当
         根据机型选择合适的ROX
    2、模板浓度过高
         适当稀释模板,减少扩增抑制
    3、基线设置不正确
         基线起始于3-10个循环,终止于指数扩增前

    溶解曲线不是单峰
    1、引物设计及用量
         重新设计退火温度较高(58-62℃),无错配,Blast对比特异的引物;引物用量合适(0.2-0.4μM)
    2、模板有基因组污染
         优化RNA提取方法;选择合适的反转录试剂;跨内含子设计引物
    3、基因表达量低
         增加反转录效率,适当提高模板量
    4、扩增体系不佳
         使用灵敏度高,特异性强的试剂

    引用及参考文献:

    1.Systematic Analysis of Cotton Non-specific Lipid Transfer Protein Family Revealed a Special Group That Is Involved in Fiber Elongation

    Meng, Chengsheng Yan, Yuanyuan Liu, Zhengwen  Chen, Liting Zhang, Yan Li, Xiuxin Wu, Liqiang Zhang, Guiyin Wang, Xingfen Ma, Zhiying  

     Frontiers in Plant Science (2018)

    2.Comparative Proteomic and Physiological Analyses of Two Divergent Maize Inbred Lines Provide More Insights into Drought Stress Tolerance Mechanisms

    Zenda, Tinashe Liu, Songtao Wang, Xuan Jin, Hongyu Liu, Guo Duan, Huijun

    International Journal of Molecular Sciences (2018)


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